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活細胞的免疫熒光染色方案

發(fā)布時間:2018/7/25點擊次數(shù):2981

ESI BIO的使命是成為客戶信賴的合作伙伴,將科學(xué)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化為診所。我們通過提供突破性的干細胞技術(shù)作為研究級和治療級產(chǎn)品來實現(xiàn)這一目標,從研究到診所的照明,以幫助我們的客戶實現(xiàn)他們治療疾病的目標。

ESI BIO建立在豐富的創(chuàng)新和科學(xué)的基礎(chǔ)之上。我們于2000年在新加坡成立了ES Cell International,在那里我們通過制造個可翻譯的臨床級胚胎干細胞系來創(chuàng)建歷史,以便分發(fā)給研究界。

 

ESI BIO現(xiàn)在開展業(yè)務(wù)Alameda CA. 我們是BioTime,Inc。擁有的以干細胞為基礎(chǔ)的子公司的驕傲家族的成員,我們從中受益于的科學(xué),知識產(chǎn)權(quán)和干細胞技術(shù)的深層來源。

抗體

 

胚胎干細胞(ESCs)和誘導(dǎo)多能干細胞(iPSCs)的表征是干細胞研究中的關(guān)鍵步驟。驗證起始細胞群的常規(guī)過程應(yīng)該簡單,快速,重要的是可靠,以確保準確和一致的結(jié)果。ESI BIO為您提供關(guān)鍵抗體形式和活體染色工具,這些工具專為干細胞直接開發(fā)和測試而開發(fā)。

快速而可靠的多能性驗證
ESI BIO的BioLite™抗體可直接染色培養(yǎng)液中的活細胞,因此無需犧牲可用于下游實驗的有價值物質(zhì)。

· 確認多能性標志物表達

· 允許在染色后繼續(xù)細胞培養(yǎng)

· 低內(nèi)毒素,不含Sodium azide的配方

· 無需固定或透化,僅需孵育30分鐘

 



圖1. [A]小鼠ES細胞的IF分析。用BioLite SSEA-1(Dy-Light 488)抗體染色后培養(yǎng)細胞和相同視野的相差圖。[B] IF重組成人成纖維細胞第11天的原代iPS細胞集落的IF分析。用BioLite TRA-1-81(DyLight 488)抗體染色后培養(yǎng)細胞和相同視野的相差圖。以10X放大率拍攝圖像。

 

活細胞的免疫熒光染色方案  見附件

活細胞免疫熒光染色

描述

本協(xié)議描述了用BiLite™抗體直接免疫熒光(IF)染色活細胞的方法。所有的步驟都應(yīng)該在無菌的工作環(huán)境中進行。 g新鮮培養(yǎng)基。請注意:

次使用一種抗體時,建議對抗體進行滴定,以達到特定于細胞類型的*性能。

·細胞可以在多孔板中直接生長、處理和染色。·只需在生物安全柜中打開抗體,以防止可能的污染。

·保護熒光共軛物不受光線照射。所需材料

所需設(shè)備

-BioLiteTM抗體(CAT)。否ST11006或貓。否ST11008)

37°C和5% CO2培養(yǎng)箱

細胞培養(yǎng)基

熒光顯微鏡

·多能干細胞

實驗協(xié)議

參考技術(shù)數(shù)據(jù)表中推薦的起始濃度,并滴定一次抗體,以獲得*的細胞類型性能。

原抗體在新鮮細胞培養(yǎng)基中稀釋至確定的*濃度

將培養(yǎng)液從細胞孔中吸出染色,直接將稀釋后的抗體加入活細胞的培養(yǎng)井中。

在37℃下用5%CO2孵化器孵育30分鐘。

吸出一次抗體,用新鮮培養(yǎng)基輕輕沖洗兩次。

向井內(nèi)加入新鮮細胞培養(yǎng)基。

用熒光顯微鏡和適當?shù)臑V鏡檢查細胞。

8.將細胞返回孵化器并繼續(xù)正常培養(yǎng)。

BioLite™ SSEA-1 (DyLight 488) anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL 

通過免疫熒光染色檢測活的,未固定的多能干細胞群中的SSEA-1表達。

 

ST11006

 

BioLite™表面標記允許對活的,未固定的多能干細胞群進行直接免疫熒光染色。抗體經(jīng)過細致的應(yīng)用測試和驗證,以確保它們是無菌的,無毒的,不含Sodium azide,并且不含培養(yǎng)病原體。與未處理的細胞相比,用BioLite抗體染色的菌落能夠在培養(yǎng)中繼續(xù),對增殖和分化潛能沒有不利影響。

背景技術(shù)階段特異性胚胎抗原-1(SSEA-1)是在早期小鼠胚胎,鼠胚胎癌(EC),鼠胚胎干(ES)和鼠和人胚(EG)細胞表面上表達的碳水化合物表位。未分化的人EC和ES細胞沒有明顯的免疫反應(yīng)性。人EC的分化導(dǎo)致SSEA-1表達的增加,而小鼠的表達減少。SSEA-1與細胞粘附,遷移和分化有關(guān)。

 

濃度 0.5毫克/毫升

物種反應(yīng)性 人類,老鼠

主辦 小鼠單克隆

克隆 MC-480

同型 IgM,κ

免疫原 F9四角癌干細胞(X射線照射)

公式 0.2μm過濾滅菌的磷酸鹽緩沖溶液,pH 7.2,不含防腐劑。通過LAL測試確定,內(nèi)毒素水平<0.1EU /μg蛋白質(zhì)(<0.01ng /μg蛋白質(zhì))。配方不含細菌,真菌和支原體。

儲存和穩(wěn)定性 儲存在2-8°C避光。根據(jù)指示存放,自收到之日起6個月內(nèi)穩(wěn)定。

BioLite格式不含防腐劑,因此必須在無菌條件下處理。

應(yīng)用程序測試 對活的,未固定的小鼠ES細胞進行免疫熒光(IF)

推薦的稀釋液 免疫熒光1:100

流式細胞儀1:100

建議針對每種應(yīng)用滴定抗體以獲得*性能。

替代名稱 CD15,階段特異性胚胎抗原1

 

 

貨號

品名

規(guī)格

品牌

ST11006

BioLite™ SSEA-1 (DyLight 488) anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

ST11008

BioLite™ TRA-1-81 (DyLight 488) anti-Human Antibody, 100 μL

 100 μL

esibio

ST11023

Nestin anti-Human Antibody, 100 μL

 100 μL

esibio

ST11003

Oct4 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

 ST11001

Sox2 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

ST11013

SSEA-1 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

 ST11014

SSEA-3 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

ST11015

SSEA-4 anti-Human Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

ST11018

TRA-1-60 (PE) anti-Human Antibody, 100 μL

 100 μL

esibio

ST11016

TRA-1-60 anti-Human Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

ST11017

TRA-1-81 anti-Human Antibody, 100 µL

 100 µL

esibio

 ES-700

ESI-017 Human Embryonic Stem Cell Line

ea

esibio

ES-701

ESI-035 Human Embryonic Stem Cell Line

ea

esibio

 ES-702

ESI-049 Human Embryonic Stem Cell Line

ea

esibio

ES-703

ESI-051 Human Embryonic Stem Cell Line

ea

esibio

ES-704

ESI-053 Human Embryonic Stem Cell Line

ea

esibio

ES-706

Human Embryonic Stem Cell Bundle

ea

esibio

 

 

上海起發(fā)實驗試劑有限公司是實驗試劑一站式采購服務(wù)商

1:強大的進口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進口品等。

2:產(chǎn)品種類齊全,經(jīng)營超過700多個品牌,基本涵蓋所有生物實驗試劑耗材。

3:提供加急服務(wù),貨品一般1-2周到貨。

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5:多年積累良好的信譽,大部分客戶提供貨到付款服務(wù)。客戶包括清華、北大、交大、復(fù)旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、國藥、fisher等藥企。

6:我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等幾十家國外公司授權(quán)代理。

7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批發(fā),歡迎合作。

 

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