慢病毒濃縮試劑（5x）說明書

上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時，把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè)，共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國生物制造企業(yè)，圓夢中國。

產(chǎn)品詳情

產(chǎn)品描述

慢病毒濃縮試劑（5x）是針對慢病毒富集而優(yōu)化的聚合物材料，它提供了一種簡單、快速、高效的慢病毒顆粒濃縮方法。只需將慢病毒上清液與慢病毒濃縮試劑按比例混合，短時間孵育，采用標(biāo)準(zhǔn)離心機(jī)進(jìn)行離心即可得到慢病毒顆粒沉淀。超濾、超速離心法等病毒濃縮法，操作時間長，步驟繁瑣，且通常會有細(xì)胞碎片和血清蛋白等的污染，病毒純度低。使用本產(chǎn)品進(jìn)行病毒濃縮后，病毒滴度可提高10-100倍，病毒回收率最高可達(dá)約90%，病毒損失少，并且病毒在濃縮過程中能保持病毒生物活性。整個實(shí)驗(yàn)過程可在4小時內(nèi)快速完成，無需超速離心即可獲得出色的回收效率。

產(chǎn)品特點(diǎn)

　簡單快速——操作簡單，無需超速離心，確保活性，實(shí)驗(yàn)耗時不超過4小時

　　濃縮效果優(yōu)——病毒滴度可濃縮10-100倍以上

　　回收效率高——慢病毒回收效率高達(dá)90%以上

　　應(yīng)用范圍廣——適用于所有類型的慢病毒顆粒

使用方法

使用方法

1.將含有慢病毒顆粒的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至無菌容器中，300xg離心10分鐘以除去細(xì)胞碎片。

　　?為保證病毒活性，濃縮前的病毒上清液應(yīng)盡量選擇新鮮收集的病毒原液。

　　2.使用0.22μm過濾器過濾上清液至無菌容器中。

　　?如果使用濾膜過濾，推薦使用低蛋白結(jié)合力的纖維素醋酸酯或聚醚砜（PES）膜，不推薦使用硝酸纖維素膜（NC）。

　　3.向每4體積含慢病毒的上清液中加入1體積慢病毒濃縮試劑（5x），使慢病毒濃縮試劑（5x）稀釋為工作濃度（1x）。

　　4.將上述混合物于4℃搖床中慢速孵育3小時或過夜。

　　?慢病毒顆粒在4℃可穩(wěn)定長達(dá)4天。

　　5.將混合物4℃4000xg離心25分鐘。離心后，慢病毒顆粒可能在容器底部顯示為米色或白色沉淀。

　　6.小心棄去上清液，4℃4000xg離心5分鐘，再次棄盡殘余液體，應(yīng)盡量避免吸走沉淀物，該沉淀物即為慢病毒顆粒。

　　7.用初始體積（原上清液體積）1/10-1/100預(yù)冷的慢病毒保存液重懸病毒顆粒，使用移液器小心吹打，重懸慢病毒顆粒。

　　?重懸病毒沉淀時，吹打操作要輕柔，可選擇慢病毒保存液（LS110R）、Complete medium或FBS重懸慢病毒。

　　8.小體積分裝慢病毒，儲存于-80℃冰箱或液氮中，留取少量病毒測定滴度。

　　?應(yīng)盡量避免慢病毒反復(fù)凍融，否則會降低病毒滴度。

實(shí)驗(yàn)案例分析

注意事項(xiàng)

　1.為了您的健康安全，請規(guī)范操作，穿戴實(shí)驗(yàn)服與手套開展實(shí)驗(yàn)；

　　2.所有慢病毒操作均需在生物安全柜（BSL2級）中進(jìn)行；

　　3.本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及治療。

運(yùn)輸及保存方法

冰袋（wetice）運(yùn)輸。4℃保存，有效期12個月。

產(chǎn)品描述

細(xì)胞周期（cell cycle）是指連續(xù)分裂的細(xì)胞從一次分裂完成開始到下次分裂為止的全過程，分為間期和分裂期（M期），細(xì)胞間期又分為休眠期（G0期）,DNA合成前期（G1期），DNA合成期（S期），DNA合成后期（G2期）整個周期可以表示為：G0-G1-S-G2-M。

本公司生產(chǎn)的細(xì)胞周期檢測是通過經(jīng)典的碘化丙啶染色色 (Propidium iodide staining，PI staining)方法進(jìn)行周期分析的檢測試劑盒。PI是一種DNA的熒光染料，可以結(jié)合雙鏈DNA產(chǎn)生熒光，其熒光強(qiáng)度與DNA的含量成正比。經(jīng)碘化丙啶染色后假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2，正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1-2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化導(dǎo)致部分基因組DNA片段在染色過程中丟失，因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強(qiáng)度小于1，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細(xì)胞峰。利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行熒光分析從而對DNA進(jìn)行定量，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞周期檢測。

產(chǎn)品組成

本試劑盒常用于貼壁細(xì)胞或者懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，如果檢測對象為組織樣品，必須消化成單個細(xì)胞后在進(jìn)行染色檢測，規(guī)格為50T，每T可檢測的樣本的細(xì)胞數(shù)量在10-100萬之間。

運(yùn)輸與保存

冰袋運(yùn)輸，-20℃保存一年。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：

a. 對于貼壁細(xì)胞：收集培養(yǎng)液上清，PBS潤洗細(xì)胞一遍，胰酶消化細(xì)胞，加入前面收集的培養(yǎng)液終止消化，得到的細(xì)胞懸液1000g離心5min收集細(xì)胞沉淀備用。

b. 對于懸浮細(xì)胞：1000g左右離心3-5 min，沉淀細(xì)胞。

（如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力）

2.細(xì)胞固定：

（1）向步驟1收集得到的沉淀中加入300 μL預(yù)冷的PBS，輕柔吹打混勻，輕柔渦旋的過程中滴加700 μL預(yù)冷的無水乙醇，最后于4℃固定30 min或更長時間。通常固定2 h或以上更能保證染色效果，固定12-24h可能效果更佳。

（2）1000g左右離心5 min去除固定液，預(yù)冷PBS清洗一遍后再次離心，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。

3. 細(xì)胞染色：

（1）參考下表配制碘化丙啶染色液（配置好的碘化丙啶染色液4℃保存，宜當(dāng)日內(nèi)使用）：

（2）每個樣品中加入0.5 mL的碘化丙啶染色液緩慢并充分重懸細(xì)胞沉淀， 37oC避光孵育30min。隨后可以4oC或冰浴避光存放。染色完成后宜在24 h內(nèi)完成流式檢測。

4.流式檢測分析：檢測激發(fā)波長為488 nm處紅色熒光，用流式細(xì)胞儀對DNA含量進(jìn)行分析，確定細(xì)胞周期變化情況。

注意事項(xiàng)

（1）需自備PBS和70%乙醇，整個過程避光操作。

（2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套。

（3）本產(chǎn)品僅作科研用途！